Verificarea eficacității sterilizării autoclavelor

Unul dintre cele mai esențiale instrumente dintr-un laborator de microbiologie este sterilizatorul, autoclava (sterilizatorul cu aburi de înaltă presiune) fiind cel mai des utilizat. Conform GB 4789.1-2016, echipamentele de laborator ar trebui să fie inspectate și/sau calibrate în mod regulat (cu etichete de inspecție), întreținute și deservite pentru a asigura o performanță adecvată și siguranță operațională. Dar autoclava dvs. a suferit astfel de inspecții? Și dacă doriți să efectuați verificări, cum ar trebui să o faceți? Astăzi, vom rezuma metodele cheie pentru verificarea eficacității de sterilizare a autoclavelor.

Verificarea eficacității sterilizării autoclavei include, în general, metode precum indicatorul chimic, termometrul maxim, tubul de temperatură auto-fabricat și indicatorul biologic. Deși aceste metode împărtășesc principii similare - confirmând în mod interesant dacă sterilizatorul atinge temperatura necesară în timpul sterilizării - puteți alege unul sau mai multe pe baza condițiilor specifice ale laboratorului.

1. Metoda indicatorului chimic

Principiul: indicatorii chimici suferă o schimbare de culoare sau formă în condiții specifice de temperatură și timp. Această modificare este utilizată pentru a determina dacă au fost îndepliniți parametrii de sterilizare.

Un articol utilizat frecvent în laboratoare este banda de indicator de autoclave 3M, care schimbă culoarea după sterilizare. Banda este fabricată din substanțe chimice termosensibile, dezvoltatori de culori și materiale de vopsea, imprimate într -un model de dungi pe banda adezivă. Se aplică direct la exteriorul pachetului de sterilizare, cu o lungime minimă de 5 cm. Apăsați ușor banda pentru a asigura o bună aderență și sigilare. După ce a fost expus la 121 ° C timp de 20 de minute sau 130 ° C timp de 4 minute, dungi albe diagonale de pe bandă ar trebui să devină complet negre. Dacă schimbarea culorii este inegală sau incompletă, pachetul este considerat nu este sterilizat corect.

2. Metoda termometrului maxim

Principiu: Această metodă folosește un termometru de mercur care nu revine la o temperatură mai scăzută odată încălzit, similar cu un termometru medical tradițional. Indică temperatura maximă atinsă în timpul sterilizării.

Pentru verificare, așezați termometrul de mercur în interiorul unui balon Erlenmeyer plin de apă. În timpul sterilizării, poziționați balonul în secțiunile superioare și inferioare ale autoclavei. După proces, verificați dacă citirea termometrului se potrivește cu temperatura necesară. Această metodă poate verifica doar temperatura și nu poate confirma dacă a fost îndeplinită cerința timpului de sterilizare, astfel încât reprezintă standardul minim pentru verificarea autoclavei.

3. Metoda tubului de temperatură auto-fabricată

Principiul: Această metodă folosește anumite substanțe chimice care se topesc și recristalizează la temperaturi specifice, cu forme de cristal distincte post-răcire. Aceste substanțe chimice sunt sigilate în tuburi mici de sticlă și așezate în interiorul autoclavei. După sterilizare, forma cristalului este examinată pentru a determina dacă a fost atinsă temperatura corectă.

Acidul benzoic este utilizat în mod obișnuit, cu un punct de topire de 121-123 ° C, care se aliniază cu temperatura standard de sterilizare a autoclavei. Acidul benzoic solid este sigilat în tuburi mici de sticlă și plasat în autoclave. După sterilizare, starea acidului benzoic este observată pentru a confirma dacă temperatura țintă a fost obținută. Ca și metoda termometrului maxim, această abordare verifică doar temperatura, nu durata sterilizării.

4. Metoda indicatorului biologic

Principiul: Această metodă folosește spori non-patogeni ai Geobacillus stearothermophilus ca organisme indicatoare pentru a evalua eficacitatea sterilizării termice. Acești spori sunt extrem de rezistenți la căldură, cu rezistență similară cu cea a sporilor patogeni de Clostridium botulinum, ceea ce le face indicatori adecvați pentru verificarea eficacității sterilizării.

Indicatorii biologici sunt disponibili în trei forme: suspensii de spori, benzi de spori și tuburi integrate de spor și mediu. Acestea sunt de obicei plasate în cinci locații în recipientul de sterilizare: partea din față, din mijloc și din spate a stratului inferior, precum și punctele centrale ale straturilor superioare și mijlocii. După sterilizare, indicatorii sunt inoculați în apă bromocresol purpuriu-glucoză-peptonă și incubate la 55–60 ° C timp de 2-7 zile. Dacă mediul rămâne clar și neschimbat de culoare, sporii au fost uciși, ceea ce indică o sterilizare bună. Dacă mediul devine galben și turbid, sporii au supraviețuit, ceea ce sugerează o performanță slabă de sterilizare. Atât suspensiile de spori, cât și benzile de spori urmează același proces de validare.

Tuburile de indicatori biologici comerciale sunt, de asemenea, utilizate în mod obișnuit în laboratoare. Conțin spori de Geobacillus Stearothermophilus și un fioule de sticlă sigilată cu mediu de creștere. Tuburile sunt plasate în întregul recipient de sterilizare. După autoclavarea, fiola de sticlă este zdrobită pentru a elibera mediul, iar tubul este incubat la 56 ° C, alături de un control pozitiv. Dacă sterilizarea este inadecvată, sporii supraviețuitori vor crește și vor transforma bulionul galben. Dacă sterilizarea este eficientă, sporii sunt inactivați, iar bulionul rămâne violet.

Frecvență de verificare

În prezent, nu există un standard național strict în ceea ce privește frecvența verificării eficacității autoclave. Laboratoarele sunt de așteptat să -și stabilească propriile programe de verificare și să le adere strict. Având în vedere atât ușurința de utilizare, cât și fiabilitatea rezultatelor, vă recomandăm să utilizați banda indicator în combinație cu tuburile indicatoare biologice, deoarece oferă o funcționare simplă și o verificare cuprinzătoare a eficacității sterilizării.

Note privind sterilizarea (nu este necesară pentru unele autoclave automate importate complet automate)
Când utilizați un sterilizator cu aburi de înaltă presiune, este crucial să expulzați tot aerul rece din interiorul camerei atunci când este eliberat aburul. Numai după ce tot aerul rece este îndepărtat, dacă supapa de evacuare este închisă. Dacă rămâne un aer, ecartamentul de presiune poate indica presiunea corectă, dar temperatura reală din interiorul camerei va scădea. Cu cât este mai mare aer, cu atât este mai mare discrepanța dintre presiune și temperatură, ceea ce poate duce la o sterilizare incompletă. (Acest lucru este adesea observat în timpul sterilizării mediilor de fermentare, unde bulele de aer rămân în tuburi mici de ghidare - încercați să epuizați mai bine aerul rece.)