Verificarea efectului de sterilizare autoclavă

Unul dintre instrumentele esențiale de laborator dintr -un laborator de microbiologie este sterilizatorul, autoclavele fiind tipul cel mai des utilizat. Conform GB 4789.1-2016, echipamentele de laborator ar trebui să fie inspectate și/sau calibrate în mod regulat (cu etichetare corespunzătoare), întreținute și deservite pentru a asigura performanța și siguranța operațională. Dar sterilizatorul tău suferă inspecții similare? Dacă este necesară o astfel de validare, cum ar trebui să fie realizată?

Astăzi, vom rezuma aspectele cheie ale validării eficacității sterilizării pentru autoclave.

Metodele comune pentru validarea eficacității sterilizării autoclavei includ metoda indicatorului chimic, metoda termometrului cu punct fix, metoda sondei de temperatură auto-fabricată și metoda indicatorului biologic. Principiile din spatele acestor metode sunt similare, concentrându -se în principal pe verificarea dacă temperatura din interiorul sterilizatorului atinge nivelul necesar în timpul sterilizării. În funcție de condițiile specifice ale laboratorului, una sau mai multe metode pot fi selectate pentru validare.

1. Metoda indicatorului chimic
Principiul: indicatorii chimici suferă schimbarea culorii sau deformarea atunci când sunt expuși la o temperatură și durată specifică, permițând evaluarea dacă au fost îndeplinite parametrii de sterilizare.

Un indicator utilizat frecvent în laboratoare este banda de indicator autoclave 3M, care schimbă culoarea înainte și după sterilizare pentru a indica eficiența. Această bandă este fabricată cu substanțe chimice sensibile la căldură și agenți de dezvoltare a culorilor imprimate în dungi pe o bandă adezivă specială. Banda trebuie aplicată la exteriorul pachetului, cu o lungime minimă de 5 cm și apăsată ferm pentru o mai bună aderență și sigilare. După sterilizare la 121 ° C timp de 20 de minute sau 130 ° C timp de 4 minute, dungi albe diagonale de pe bandă se vor transforma complet negru. Dacă schimbarea culorii este inegală sau incompletă, este posibil ca pachetul să nu fi îndeplinit condiții de sterilizare.

2. Metoda termometrului cu punct fix
Principiu: Această metodă folosește un termometru de mercur care păstrează cea mai ridicată temperatură atinsă, similară cu un termometru clinic tradițional. Ajută la determinarea temperaturii maxime obținute în interiorul autoclavei în timpul sterilizării.

Pentru validare, un termometru de mercur este plasat în interiorul unui balon conic mare umplut cu apă. În timpul sterilizării, balonul este poziționat atât în ​​secțiunile superioare, cât și la cele inferioare ale autoclavei. După sterilizare, citirea termometrului este verificată cu temperatura necesară. Cu toate acestea, această metodă verifică doar temperatura și nu confirmă dacă durata de sterilizare a fost suficientă, ceea ce o face cel mai de bază standard pentru validarea autoclavei.

3. Metoda sondei de temperatură auto-făcută
Principiul: Această metodă folosește caracteristicile de topire și recristalizare a anumitor substanțe chimice atunci când sunt expuse la căldură. Prin sigilarea acestor substanțe chimice în tuburi mici de sticlă și plasându -le în autoclavă, formarea de cristal după sterilizare poate indica dacă a fost atinsă temperatura necesară.

Un reactiv utilizat frecvent este acidul benzoic, care are un punct de topire de 121-123 ° C, care se potrivește îndeaproape cu temperatura de sterilizare necesară. În timpul sterilizării, acidul benzoic solid este sigilat într -un tub mic de sticlă și plasat în interiorul autoclavei. După proces, structura cristalină a acidului benzoic este examinată pentru a determina dacă a fost obținută temperatura necesară.

Ca și metoda termometrului cu punct fix, această abordare indică doar temperatura și nu poate confirma dacă durata de sterilizare a fost suficientă.

4. Metoda indicatorului biologic
Principiul: Această metodă folosește sporii geobacilului stearothermophilus non-patogenici ca organisme indicatoare pentru a evalua eficacitatea sterilizării căldurii. Acești spori sunt foarte rezistenți la căldură și au o rezistență termică similară cu sporii Clostridium Botulinum, ceea ce le face o referință fiabilă pentru evaluarea dacă autoclava îndeplinește cerințele de sterilizare.

Indicatorii biologici vin în trei forme:

Suspensii de spori
Benzi de spori
Benzi de spori combinate cu un mediu de cultură (tuburi indicatoare biologice)
Indicatorii biologici sunt de obicei plasați în cinci locații din camera de sterilizare:

Nivel inferior: față, mijloc și spate
Nivel superior: centru
După sterilizare, indicatorii sunt inoculați în apă de peptonă purpur-glucoză bromocresol și incubate la 55–60 ° C timp de 2-7 zile:

Dacă mediul de cultură rămâne clar și neschimbat de culoare, sporii au fost uciși, ceea ce indică o sterilizare eficientă.
Dacă mediul devine galben și turbid, sporii au supraviețuit, ceea ce înseamnă că procesul de sterilizare a fost ineficient.
Aceeași metodă de validare se aplică atât suspensiilor de spori, cât și benzilor de spori.

Multe laboratoare folosesc, de asemenea, tuburi de indicatori biologici comerciale, care funcționează similar cu suspensiile și benzile de spori. Aceste tuburi conțin spori G. stearothermophilus împreună cu un fioule de sticlă de mediu de cultură. După autoclavarea, fiola de sticlă din interiorul tubului este zdrobită pentru a elibera mediul de cultură, iar tubul este incubat la 56 ° C, cu un control pozitiv inclus.

Dacă sterilizarea a fost ineficientă, sporii viabili vor crește, întorcând bulionul galben.
Dacă sterilizarea a avut succes, sporii sunt inactivați, iar bulionul rămâne violet.
Frecvența validării autoclave
În prezent, nu există standarde de reglementare stricte care să definească cât de des trebuie validate autoclavele. Cu toate acestea, laboratoarele ar trebui să -și stabilească propriul program de validare și să respecte strict acest lucru.

Pentru o ușurință de funcționare și validarea fiabilă, banda indicatoare chimice și tuburile indicatoare biologice sunt foarte recomandate. Aceste metode sunt ușor de utilizat și oferă o evaluare cuprinzătoare a eficacității sterilizării.

Considerații cheie pentru autoclavarea
(Este posibil ca unele autoclave importate complet automatizate să nu necesite aerisire manuală)

Când utilizați un autoclave, este esențial să îndepărtați aerul rece din cameră în timp ce introduceți abur. Venturarea de evacuare ar trebui să rămână deschisă până când tot aerul rece este expulzat, asigurând o distribuție uniformă a temperaturii în interior.

Dacă rămâne un aer în interiorul camerei, ecartamentul de presiune poate indica presiunea corectă, dar temperatura reală va fi mai mică decât se aștepta. Cu cât este mai mare aer rezidual, cu atât este mai mare discrepanța, ceea ce duce la sterilizare incompletă.

(Pentru cei care întâlnesc bule de aer în tuburi mici atunci când sterilizează media pe bază de fermentație, încercați să creșteți evacuarea aerului pentru a îmbunătăți rezultatele.)